4.色谱柱压力问题

4. 色谱柱背压
随着色谱柱的老化，柱背压不可避免地不断升高（导致柱背压升高是无法避免的）；而较高的柱背压是色谱柱失效最常见的原因之一。

然而，一些简单的方法将有助于延长色谱柱的使用寿命，其中包括使用串联（在线）过滤器（见4.2）、?；ぶㄌ祝ㄐ荆?.3）和进行常规（定期）的色谱
柱冲洗。

4.1.确定压力问题是一个简单的过程（定位压力异常的位置的步骤很简单）。

如果您使用串联（在线）过滤器，则它极有可能是压力增加的来源（原因），因此应首先对它进行检查，以节省故障排除时间。

如果不是（另外），可系统地松开管接头，从HPLC出口端开始，向上游泵逐个检查，这是发现致因最简单的方法（查找压力升高原因最简单的方法是系统
性的逐段拧松管路上的接头，从HPLC的出口开始，往上游递进直到泵）。

除了色谱柱外，每个连续的元件都从系统中取出，压降会出现可以忽略不计的变化。例如，拆除检测器，然后将检测器连接到色谱柱的管路后（将检测器的管路直接连到色谱柱上），其不应导致背压的显着降低，除非其中一个（一处）被阻塞（拆下检测器，再拆下连接检测器与色谱柱的管路，不应导致色谱柱反压明显降低，但如果检测器或管路有堵塞，则会有明显降低）。

当色谱柱被移除时，压力当然会下降；根据正常色谱柱压力的历史信息（以前正常状态下的柱压的数据以）确定色谱柱是否是问题的致因。

一旦确定了压力问题的根源，应更换管路或反冲阻塞部分

4.2.串联滤器（在线过滤器）是延长色谱柱寿命的最经济和最有效的工具之一。

通常情况下，这些过滤器具有0.5m的孔隙度玻璃料（孔径筛板），安装在自动进样器的下游（之后），用于拦截来自流动相、泵、自动进样器或样品中的任何颗粒。

对于5 m的颗粒柱，其色谱柱顶部的玻璃料通常采用2m的孔隙度玻璃料（进口端的筛板的孔径多为2m）。

因此串联玻璃料（在线滤器）有助于防止色谱柱阻塞。串联（在线）过滤器不可替代溶剂过滤或其它预防措施，而应将其作为?；ど字谋秆》桨?。

当系统背压开始升高时，应检查和/或更换串联过滤器玻璃料（在线滤器的滤片）。

我们建议在每个系统上使用串联（在线）过滤器，即使在使用?；ぶ币彩侨绱耍ㄒ丫褂昧吮；ぶ?。

4.3.保护柱卡套（芯）可为色谱柱提供双重?；?。如果不使用串联（在线）过滤器，?；ぶㄌ锥ゲ康牟ＡЯ希ǘゲ康纳赴迦裕┗崂菇乜帕＃饪赡?br /> 会阻塞色谱柱入口端的玻璃料（否则，被阻塞的就是色谱柱入口端的筛板）。

?；ぶㄌ祝ㄐ荆┲械墓潭ㄏ嘤τ敕治鲋ヅ洌员憷菇鼗嵛降椒治鲋系奈镏?。因此，?；ぶㄌ祝ㄐ荆┰谙低持谐涞毕脑?。

如果系统压力上升了10％，且柱的效率或分辨率下降了10％，并且无法通过更换串联（在线）过滤器纠正，则说明应更换?；ぶㄌ琢耍ㄈ绻谙吖?br /> 器更换后没有解决系统压力升高10%的问题，则说明应该更换?；ぶ荆菜得髦Щ蚍直媛室丫档土?0%。）。图13显示了?；ぶㄌ祝ㄐ荆┰诒；し治鲋矫娴挠行?。

使用?；ぶㄌ祝ㄐ荆┛梢苑乐怪廴荆⑾灾嵘酥氖褂檬倜?。

图13. 为了防止色谱柱积垢，使用?；ぶㄌ祝ㄊ褂帽；ぶ究煞乐股字廴荆┛上灾映ど字氖褂檬倜?

4.4缓冲液沉淀是导致背压增加的常见原因，特别是在反相色谱中，如果流动相是高浓度的有机溶剂，这点尤其明显。

如果尝试去除色谱柱中的缓冲液沉淀，可颠倒色谱柱（将色谱柱反接），并用泵注入20-40个柱体积的纯净水冲洗色谱柱，开始时以降低的流量输送（流速需慢）（注意：如果缓冲液已经在整个色谱柱中沉淀（堵塞全柱），这种方法可能不适用）。
如果冲洗成功，应将色谱柱恢复到正确的流动方向（接回原方向），并用50:50的水/有机流动相冲洗10-20个柱体积，然后再加入10-20个柱体积的100％有机流动相（再用10-20倍柱体积的100%有机流动相冲洗），最后在所需条件下重新平衡。
为了防止再次出现缓冲液沉淀，应检查流动相是否与所用的缓冲液浓度相匹配，并在必要时降低离子强度。尝试增加水的百分比，并预混合流动相。

通过反相分离，可避免含有缓冲液的流动相迅速变为100％的有机溶剂（如MeOH，ACN）（反相分离时，避免含缓冲液的流动相突然变化至100%有机溶剂（如甲醇、 乙腈））。