液相色谱柱用完后的正确冲洗（清洗、保存）对于延长色谱柱寿命、避免交叉污染、保证下一次分析的准确性极为重要。下面以反相色谱柱（如C18柱）为例，介绍常规HPLC柱子的冲洗步骤和注意事项：

一、冲洗流程

1. 停止进样、去除样品

停止进样，确保色谱柱中没有残留新样品注入。

2. 切换至流动相A（低盐、无缓冲液）

若所用流动相含有缓冲盐或强酸（碱），用不含盐的流动相A（如纯水/甲醇、纯水/乙腈等）冲洗5-10分钟，去除盐分，防止盐析于填料造成破坏。

3. 有机溶剂比例递增

逐步增加有机溶剂比例（如甲醇或乙腈），可以采用10%→30%→50%→70%→100%的流程，每一步持续3-5柱体积（依据色谱柱内径和长度校算）。

冲洗高比例有机溶剂，能将柱子中的疏水性污染物等彻底洗脱。

4. 必要时采用不同溶剂清洗

若遇到难溶的化合物，可依次用其他清洗剂，如异丙醇、丙酮、极性更强的溶剂（依据色谱柱说明书选择，避免破坏硅胶基体）。

5. 最后用保存溶液冲洗

清洗完毕后，用推荐的色谱柱保存液（一般为甲醇或乙腈）充分冲洗，填充后密封保存。

二、常见C18柱冲洗方案举例

刚完成反相流动相（如水/乙腈）实验，可直接用100%乙腈冲洗20-30分钟。

若含缓冲盐，先用50%水/乙腈冲洗，确保盐分排出，再过渡至100%乙腈冲洗。

严重污染时，可尝试如下溶剂依次冲洗：

水 → 甲醇 → 异丙醇 → 纯甲醇（或纯乙腈）

注意逆向（正向）清洗要根据柱厂说明操作。

柱子长期不用时，以乙腈（或厂家推荐的保存液）封存。

三、注意事项

勿用超高流速冲洗，流速过大易损伤色谱柱填料，一般保持正常分析流速或略低流速。

避免非兼容溶剂混合，如水和氯仿等混合会分层，应按柱子说明书推荐溶剂使用。

柱温应维持在常温或厂家推荐温度，避免骤然升温或降温。

实验室需用高纯度溶剂和去离子水，溶液需过滤（0.45μm滤膜）与脱气，减少颗粒和气泡。

冲洗过程中随时观察柱压变化，如遇堵塞或异常压力应马上处理。

四、特殊柱型补充

正相柱（硅胶柱）：最后一般以己烷保存，冲洗时可依次用极性增大的有机溶剂（如己烷→异丙醇→甲醇）。

离子交换柱、亲水作用色谱柱（HILIC）：冲洗与保存方式更为特殊，须严格查阅说明书。