一、pKa和pH的基本概念

pKa：分析物（通常是酸或碱）分子解离出一半离子的酸碱常数。pKa越小，酸性越强。

pH：流动相的氢离子浓度，是溶液酸碱性的量度。

二、pH决定分析物电离/分子型比例

当pH = pKa

分子“电离型”（带电）和“分子型”（不带电）的比例约为1:1（即50%电离）。

当pH < pKa (对酸性分析物)

分析物主要为非解离“分子型”。

当pH > pKa (对酸性分析物)

分析物主要为电离“阴离子型”。

对碱性化合物正好相反：

pH < pKa：质子化（阳离子型）

pH > pKa：非离子（分子型）

三、在反相色谱中的实际意义

1. 分析物的保留与分离

非离子型分析物在反相色谱柱（C18等）上疏水作用大，保留时间长。

带电型分析物极性增强，难吸附色谱柱，保留时间短。

2. 流动相pH值选择思路

一般将pH设置在距离分析物pKa值至少1–2个pH单位以外，使其处于单一（分子型或离子型）形态，确保保留行为稳定、峰型好。

如酸性化合物pKa=5，分析时通常在pH<3或pH>7。

碱性化合物pKa=9，则用pH<7或pH>11（实际pH受色谱柱耐受限，通常2～8之间）。